近咱們技術(shù)部門(mén)的小姐姐接到好多用戶(hù)朋友的詢(xún)問(wèn)，說(shuō)“不了解正在研究的蛋白用哪個(gè)抗體合適”。

也有用戶(hù)朋友經(jīng)常詢(xún)問(wèn)“說(shuō)明書(shū)中寫(xiě)著(zhù)可以用于ICC/IF，那我做組織的熒光成像是可以的吧？”

其實(shí)在選擇正確抗體的道路上，存在很多“坑”，只要成功避開(kāi)，就可以選到適合您實(shí)驗的抗體。

今天就來(lái)和大家分享一下“如何選擇正確的抗體”。

1、蛋白的名稱(chēng)和亞型

咱們銷(xiāo)售員經(jīng)常拿到一些“似是而非”的英文名稱(chēng)或簡(jiǎn)稱(chēng)，查的時(shí)候不確定推薦的是否就是用戶(hù)要檢測的靶標。針對這個(gè)問(wèn)題，建議大家參考SwissProt蛋白數據庫，每個(gè)abcam說(shuō)明書(shū)的 “數據庫鏈接”部分，有針對不同種屬的基因和蛋白數據庫鏈接， 其中顯示SwissProt的就是該蛋白的數據庫鏈接，點(diǎn)擊進(jìn)去后，在頁(yè)面的左邊有篩選框，可以點(diǎn)擊您感興趣的部分查看。

點(diǎn)擊Names&Taxonomy部分，可以看到該靶標的基因名稱(chēng)和蛋白名稱(chēng)，以及替代名稱(chēng)，也就是所謂的“小名”，看下您提供的名稱(chēng)是否可以對應上，如此判斷該抗體是否適合。

另外，關(guān)于蛋白亞型問(wèn)題，在這里也可以找到答案，點(diǎn)擊Sequences部分，可以看到該蛋白有幾個(gè)亞型，每個(gè)亞型的具體氨基酸序列和分子量大小，如果您正好做WB實(shí)驗，就可以預估您的實(shí)驗結果，即可能檢測到的條帶位置。

不能不說(shuō)，SwissProt數據庫實(shí)在太強大了，咱們用戶(hù)常常問(wèn)到的亞細胞定位-Subcellular location，翻譯后修飾-PTM/Processing部分，具體的修飾位點(diǎn)和修飾基團等，都可以一一查看到。

2、抗體的應用范圍

常見(jiàn)的免疫學(xué)實(shí)驗，在abcam的說(shuō)明書(shū)中，主要包括如下幾種應用：WB, IHC-P,IHC-Fr,IHC-FrFl,IHC-Wmt,IHC-FoFr,ICC,ICC/IF,IP,ChIP,ChIP/Chip,ELISA,EM,Flow Cyt等等，相信大家看到這些英文單詞也會(huì )一頭霧水吧，單單一個(gè)免疫組化-IHC，就可以細分這么多操作方式，而且在不同的品牌，不同英文單詞代表的含義還不盡相同，建議大家在選購前，詢(xún)問(wèn)清楚不同品牌對應的定義和質(zhì)保范圍。

如在abcam產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中，IHC-P即免疫組化石蠟切片，且實(shí)驗室內部驗證時(shí)，是搭配酶標二抗，用DAB顯色的方式檢測的；IHC-FR即免疫組化冰凍切片，內部驗證時(shí)，是搭配熒光二抗，用熒光成像的方式檢測的；IHC-FoFr是冰凍灌注切片；IHC-FrFI是冰凍切片漂片；ICC/IF或ICC都是特指細胞水平的熒光成像，值得注意的是，這里ICC/IF里的IF，很多人會(huì )誤認為既包括組織也包括細胞的熒光成像，導致選錯抗體，做不出結果。

3、抗體能識別的樣本種屬

常見(jiàn)的檢測種屬，經(jīng)常如下描述：Reactivity：Human, Mouse, Rat, Sheep, Rabbit, Chicken, Hamster, Cat, Dog, Carp, African green monkey, Opossum, Chinese hamster, Common marmoset, Meriones unguiculatus.

有時(shí)還會(huì )見(jiàn)到如下描述：predicted: Cow, Pig, Mammals。

請大家務(wù)必注意：在abcam的說(shuō)明書(shū)里，Reactivity后面列到的種屬是可以質(zhì)保的，而predicted列到的種屬則是根據該蛋白在不同物種中的同源性比對數值，做出的推測。推測的種屬并沒(méi)有經(jīng)過(guò)實(shí)驗室驗證，是不能質(zhì)保的，僅供參考。

4、抗體的動(dòng)物來(lái)源

抗體的動(dòng)物來(lái)源即抗體的宿主物種，常見(jiàn)的有Rabbit，Mouse，Rat，Chicken，Goat，Sheep等，當您選購抗體時(shí)，建議盡量選和檢測樣本種屬不同的宿主物種，即您檢測mouse，盡量選擇非mouse來(lái)源的抗體，可以選rabbit來(lái)源的抗體。

5、制備抗體的免疫原

在說(shuō)明書(shū)中的免疫原，即Immunogen 部分，經(jīng)常如下描述，Synthetic peptide within Human X aa 200-250. The exact sequence is proprietary.或者Recombinant full length protein corresponding to X（這里的X指的是蛋白的名稱(chēng)）.建議您根據您的實(shí)驗目的，去選擇合適的抗體，如果您沒(méi)有特殊實(shí)驗要求，那么全長(cháng)的免疫原序列是不錯的選擇。

5、單克隆抗體和多克隆抗體

經(jīng)常有用戶(hù)問(wèn)到，單克隆還是多克隆抗體好？其實(shí)在回答這個(gè)問(wèn)題前，我們要先解釋下這兩者的含義，簡(jiǎn)單來(lái)講，單克隆抗體只能識別抗原的特定抗原表位，而多克隆抗體可以識別抗原的多個(gè)抗原表位，所以，單克隆抗體特異性高而靈敏度相對低一些，多克隆靈敏度高而特異性低一些，在不同實(shí)驗操作時(shí)，可以根據如下表格有側重選擇。

7、抗體的克隆號

克隆號是給單克隆雜交瘤細胞產(chǎn)生的抗體的編號。每個(gè)雜交瘤細胞克隆產(chǎn)生單個(gè)純同質(zhì)型抗體?？寺√栂嗤目贵w代表制備抗體時(shí)的免疫原序列是相同的。

8、抗體的偶聯(lián)物

常見(jiàn)的偶聯(lián)物有酶、熒光素、生物素等，常見(jiàn)的酶有辣根過(guò)氧化物酶-HRP、堿性磷酸酶-AP等，常見(jiàn)的熒光素有傳統熒光素FITC、APC、Pe、Pe-cy3、Pe-cy5等，新型熒光素包括Alexa Fluor® 系列和DyLight® 系列各波長(cháng)的熒光素，一般做多重免疫染色時(shí)，會(huì )考慮選擇直接標記熒光素的一抗，建議您先核實(shí)實(shí)驗室儀器的熒光顯微鏡或流式細胞儀的配置，選擇匹配儀器的激發(fā)波長(cháng)或通道的熒光抗體，盡量避免光譜重疊。

如果您需要尋找雙標記和三標記免疫熒光染色實(shí)驗中的常見(jiàn)組合，我們推薦如下：

9、抗體驗證

這里我們重點(diǎn)說(shuō)下目前有說(shuō)服力的基因敲除驗證，即KO驗證，該方法使用單倍體細胞模型的 CRISPR/Cas9 KO 人類(lèi)細胞系。敲除模型是真正意義上的陰性對照，是抗體驗證的標準品。

基因敲除模型通過(guò)觀(guān)察基因功能缺失的表型來(lái)了解特定基因的功能，這正是該模型的強大之處。目前，abcam有超過(guò)1600種的經(jīng)過(guò)敲除驗證的抗體，過(guò)去的一年中，還將 200 多種非特異性抗體從abcam的產(chǎn)品目錄中移除。當然敲除驗證僅是為提高抗體質(zhì)量標準所采取的眾多步驟之一。

以上就是在抗體選擇道路上常常遇到的問(wèn)題，希望對大家有所幫助。廣州東銳科技有限公司和廣州新晉生物科技有限公司作為abcam在華南區的一級授權代理商，為您的科研保駕護航，幫助您更快地達成科研使命。