- + Merck Millipore
- + Thermo Fisher
- + IKA
- + 顯微鏡
- + 光度計
- + 成像系統
- + MACS Miltenyi
- + 均質(zhì)機
- + 粒子計數器
- + 凍干機
- + 滅菌系統
- + 細胞
- + 微量移液工作站
- + 振蕩培養箱
- + 生物反應器
- + 切片機
- + 培養箱
- + 蠕動(dòng)泵
- + 細胞破（粉）碎機
- + 轉印膜
- + 超濾管
- + Pellicon 超濾系統
- + 超低溫冰箱
- + 清洗機
- + 干燥機
- + 洗瓶機
- + 離心泵
- + 容積泵
- + 各種閥
- + 酶標儀
- + 洗衣板
- + 旋光儀
- + 折光儀
- + 行星球磨機
- + 振動(dòng)篩
- + 基因導入儀
- + 手套系列
- + 接頭\\連接器
- + 培養板/培養瓶
- + 溫度控制系統
- + 制冷器
- + 存取系統
- + 軋蓋機
- + 細胞因子
- + 細胞分選儀
- + 生物安全柜
- + 滲透壓儀
- + 拉曼光譜儀
- + 電泳系統
- + 純水系統
- + 萃取儀
- + 譜新生物
- + TA 儀器
- + wako
病毒濃縮 | Amicon® Ultra超濾管應用方案
更新時(shí)間：2024-01-04 瀏覽次數：1372
基因治療是通過(guò)將特定的細胞功能改變的遺傳物質(zhì)引入患者來(lái)治療遺傳疾病。根據給藥的方式可以分為：體內基因治療（invivo）和體外基因治療（invitro）。
體內基因治療指將攜帶治療性轉基因的載體直接注入患者體內。
體外基因治療包括從患者的細胞或異體來(lái)源提取細胞，通過(guò)攜帶治療性轉基因的載體進(jìn)行基因修飾，再將該工程細胞重新導入患者體內。
基因治療的關(guān)鍵步驟是如何有效地通過(guò)遞送載體將基因傳遞到目標組織/細胞。根據載體的屬性分為：病毒類(lèi)遞送載體和非病毒類(lèi)遞送載體。不同細胞類(lèi)型的轉染效率差異很大。因此，已經(jīng)開(kāi)發(fā)了多種病毒來(lái)源的載體系統，用于改善哺乳動(dòng)物細胞中的cDNA轉導、表達和篩選。這些系統包括COS細胞中的猿病毒40復制子(SV40)以及源自逆轉錄病毒、桿狀病毒、甲病毒、人類(lèi)免疫缺陷病毒、牛痘病毒、腺病毒和腺相關(guān)病毒（AAV）的cDNA克隆和表達載體。以逆轉錄病毒、腺病毒(Ads)或腺相關(guān)病毒(AAVs)的使用最為廣泛。
在臨床試驗中使用病毒載體相關(guān)的挑戰包括生產(chǎn)足夠數量的臨床級材料和維持病毒載體的生物安全性。病毒載體的生產(chǎn)和純化在方法和病毒產(chǎn)量和質(zhì)量方面各不相同。病毒載體的生成和純化是勞動(dòng)密集型的且昂貴的，并且可能需要特殊設備（如超速離心機）。純化腺病毒、慢病毒和AAV的標準方法是使用密度梯度超速離心，然后進(jìn)行長(cháng)時(shí)間透析。近年來(lái)柱或膜層析已成為腺病毒純化的方法。病毒的產(chǎn)量通常通過(guò)空斑試驗、TCID50測定和ELISA來(lái)確定。對于大多數應用，重組病毒必須純化至高滴度。為了獲得高滴度原液，通常需要濃縮純化的病毒顆粒。
之前我們有文章介紹了使用默克Amicon®Ultra超濾管分離提取外泌體，今天給大家介紹超濾管的其它應用-濃縮病毒！下面介紹使用Amicon®Ultra離心超濾裝置濃縮三種常見(jiàn)的病毒類(lèi)型：慢病毒，腺病毒和腺相關(guān)病毒（AAV）。
宿主細胞鋪板以達到80-85%的匯合度。
細胞轉染重組質(zhì)?；蚋腥净畈《绢w粒。
根據病毒的不同，使用細胞上清液或沉淀細胞或兩者兼而有之來(lái)純化重組病毒粒子。通常應用三到四輪凍融循環(huán)從細胞中釋放病毒。然后通過(guò)離心或預過(guò)濾將細胞碎片與細胞裂解物分離。
通過(guò)密度梯度超速離心或柱/膜層析從細胞裂解物中純化病毒。在某些情況下可以使用肝素或粘蛋白瓊脂糖的親和色譜。然后將純化的病毒溶液通過(guò)透析或滲濾完成將緩沖液置換成適當的儲存溶液。
為了獲得高滴度的病毒原液，可以使用離心超濾濃縮純化的病毒。
備注：正確選擇設備、膜材料、MWCO、離心速度、離心時(shí)間和緩沖液組成對于感染性病毒顆粒的高回收率至關(guān)重要。
Amicon®Ultra超濾管采用50KDa NMWL Ultracel® 再生纖維素膜，已被證明可以成功濃縮腺病毒和AAV溶液。對于慢病毒濃度，可以使用50KDa和100kDa膜的超濾管。
下表顯示了粗制細胞裂解物和色譜純化的病毒中腺病毒、慢病毒和AAV濃度的典型結果。
表1：采用Millipore®超濾產(chǎn)品濃縮病毒
①我們不建議將病毒濃縮到超過(guò)1013顆粒/mL的濃度，以避免可能出現的病毒聚集。
②大多數病毒不能有效地濃縮并儲存在低鹽緩沖液中。病毒在濃度為<250mM鹽濃度的溶液中離心將導致病毒聚集和傳染性降低。推薦儲存溶液配方是：20mMTris、pH8.0、250mMNaCl、5%山梨糖醇和0.001%PF68（多聚糖酸）。
濃縮的病毒原液也可以通過(guò)0.22μm過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾滅菌。例如，無(wú)菌Steriflip-GP®過(guò)濾裝置（目錄號SCGP00525）可用于50mL或以下的體積或Ultrafree®MCGV（目錄號UFC30GV0S）可用于體積<0.5mL的樣品。對于較大體積的樣品，則可使用70%消毒處理過(guò)的Amicon®Ultra或Centricon®Plus70超濾管濃縮。
- (上一篇)：生物安全柜選型秘籍，雙手敬上
- (下一篇)：售后巡檢——搖床篇