01 細胞計數的重要性

對于大多數需使用細胞系的操作，如轉染、細胞融合技術(shù)、冷凍保存和傳代培養等，有必要在操作前對細胞數進(jìn)行定量。因為如果接種細胞的密度過(guò)高，實(shí)驗還沒(méi)結束細胞就會(huì )出現接觸抑制，影響細胞狀態(tài)，蛋白的表達也會(huì )受到影響；但如果密度過(guò)低最后收集到的樣品過(guò)少，檢測不到，我們要花額外的時(shí)間等待細胞長(cháng)到合適的密度。

使用相同數量的細胞將保持最佳生長(cháng)，并有助于使用細胞培養的程序標準化，這反過(guò)來(lái)也使結果具有更好的再現性。所以細胞計數非常重要，它是一個(gè)實(shí)驗成功的基礎。

文章開(kāi)頭提到的血球計數板是以往細胞計數常用的方式，它的使用較為耗時(shí)，還易受操作者主觀(guān)判斷的影響，并且某些細胞類(lèi)型，如形成簇的細胞類(lèi)型，難以用這種方法計數。

02 Scepter™3.0細胞計數儀 

現有的細胞計數設備可提供替代的細胞定量方法，這就包括我們的Scepter™3.0細胞計數儀。

Scepter™3.0細胞計數儀采用“計數金標準"庫爾特原理。

• Scepter感應器吸入精確的樣本體積；

• 細胞穿過(guò)感應器小孔時(shí)，電阻值增加。電阻值的增加導致電壓的增加；

• 每個(gè)細胞經(jīng)過(guò)時(shí)引起的電壓的增加作為一個(gè)脈沖被記錄下來(lái)；

• 用直徑和細胞數目繪制直方圖，脈沖的大小代表細胞的大小，脈沖的數目代表細胞的個(gè)數。

最大的特點(diǎn)是：

• 計數精準，提供基于細胞大小的直方圖（如上圖）；

• 手持式體積小巧；

• 可以給出細胞體積；

• 可以進(jìn)行復雜的混合型的細胞計數；

• 計數迅速，平均在30秒之內完成計數（最快14秒）。

03 檢測范圍與應用

基于細胞直徑以及樣品濃度的感應器選擇指南：

人體細胞中最小的是血小板，直徑只有約2微米；最大的是成熟的卵細胞，其直徑在200微米左右，鴕鳥(niǎo)卵細胞甚至可以達到長(cháng)15～22厘米,直徑14至15厘米。細胞的直徑和大小會(huì )直接影響覆蓋度百分比，同樣的接種濃度，Cos7和293細胞最終的覆蓋度有著(zhù)極大的區別。

讓我們來(lái)看看在分離PBMC后和流式直接對比的數據：

外周血單個(gè)核細胞(Peripheral blood mononuclear cell, PBMC)是外周血中具有單個(gè)核的細胞，包括淋巴細胞和單核細胞。外周血單個(gè)核細胞主要的分離方法是Ficoll-hypaque(聚蔗糖－泛影葡胺)密度梯度離心法。

離心獲得PBMC后分別染色通過(guò)流式進(jìn)行分群(Lymphocyte 和Monocyte)和計數，ScepterTM3.0的結果和流式在趨勢上具有很好的相關(guān)性。

無(wú)論是分群還是計數的回歸系數都達到了0.98以上。綜上所述，Scepter3.0可以準確對PBMC細胞進(jìn)行計數和分群。